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菌落总数测试片/细菌总数测试片 24片/包
点击次数:1106 发布时间:2013-03-05

 菌落总数测试片 使用说明

1、原理及适用范围
        菌落总数是指样品经过处理,在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数,是zui常用的微生物检测项目。
        菌落总数测试片(FilmplateTM Aerobic count plate BB202)是一种预先制备好的一次性培养基产品,含有标准的营养培养基,冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑(TTC),菌落在测试片上呈红色,这样可缩短计数时间和增强计数效果。
        本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定,也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。
        执行标准:食品卫生微生物学检验菌落总数测定——PetrifilmTM测试片法(GB/T 4789.2-2008)
2、操作方法
        2。1、样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液,必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6。6~7。2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL,注入含有9mL稀释液的试管内,振摇后成为1:100的样品匀液,以此类推,做出1:1000等稀释度的样品匀液,每次换一支吸管。
        2.2、接种:一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如饮用纯水和矿泉水等)可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片(BB202)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s左右使培养基凝固,每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
        2.3、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃,培养15~24h;水产品培养温度为30℃±1℃,培养48h。
3、结果判读
        细菌在测试片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(30~300个)的测试片进行计数,乘以稀释倍数后即为每毫升(克)样品中所含的细菌菌落总数。
                                                                                       
4、计数原则及报告方式
       4.1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。
       4.2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算: 
                                                                                       式中:
       N——样品中菌落数;
       ∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和;
       n1——*个适宜稀释度测试片数;
       n2——第二个适宜稀释度测试片数;
         d——稀释因子(*稀释度)。
       示例:                                               

上述数据经“四舍五入”后,表示25000或2.5×104。
        4.3、若所有的稀释度菌落总数均大于300,则对稀释度zui高的测试片进行计数,其他测试片可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以zui高稀释倍数计算。
        4.4、若所有的稀释度菌落总数均小于30,则应按稀释度zui低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
        4.5、若所有的稀释度(包括液体样品原液)均无菌落生长,则以小于1乘以zui低稀释倍数计算。
        4.6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分小于30或大于300,则以zui接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
        4。7、菌落总数的报告
        4.7.1、菌落总数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。
        4。7。2、大于或等于100时,第三位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前两位数字,后面的0代替位数,也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
        4.7.3、若测试片上一片红色无法计数时,则报告多不可计。
        4.7.4、若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
        4。7。5、称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。
5、表面取样方法
        加1mL灭菌磷酸缓冲液(或生理盐水)在测试片上,至少静置5min,使培养基凝固;提起上层膜,使中央滤纸部分贴到待测物表面,用手在外侧轻压;然后将上盖膜合上,置培养箱内培养。
6、附加说明
         6.1、菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80%以上,山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明,24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87%。
         6。2、磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌:贮存液:称取34。0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7。2,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1。25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,121℃高压灭菌15分钟,或者放入消毒碗柜中消毒。
         6。3、生理盐水的配制与灭菌:取8。5g分析纯氯化钠(NaCl)溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中,先煮开后进行分装,取9mL加入到10mL洁净试管中,盖上硅橡胶塞或棉纱塞,放入红外线消毒柜中消毒。
7、保存条件
        本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,zui好在拆封前将整包回温至室温。

北京中诺泰安科技有限公司

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